酵母雙雜交系統(Yeast two hybrid，Y2H) 常用于分析兩種蛋白質的相互作用。將兩種蛋白質分別克隆到酵母表達質粒的轉錄激活因子的DNA結合結構域（DNA-BD）和轉錄激活域（AD）上，構建成融合表達載體，從而分析兩種蛋白質的相互作用。

一、酵母感受態細胞制備

(1) 將-80℃保存的酵母菌株在YPDA固體培養基平板上劃線，30℃培養條件下倒置培養4-7d。

(2) 挑取單菌落至含3mLYPDA液體培養液中。

(3) 30℃培養，200rpm 震蕩培養8h。

(4) 當菌液OD值約為0.3時，轉移10uL菌液到含50mIYPDA培養液中。

(5) 30℃培養，200rpm震蕩培養16-20h至OD值為015-0.3。

(6) 700g轉速5min室溫離心收集細胞。

(7) 將底部沉淀使用已預熱至30℃的100mLYPDA中重懸酵母細胞。

(8) 30℃，200rpm，搖3-5h至OD值=0.6時。

(9) 5min室溫離心收集細胞。

(10) 將底部沉淀在30mL無菌超純水中重懸酵母細胞.

(11) 700g轉速5min室溫離心收集細胞。

(12) 將底部沉淀加入3mL的1.1XTE/LiAc重懸細胞。

(13) 將懸重懸細胞分成2管，6000g轉速室溫離心30s。

(15) 將底部沉淀加入500uL的1XTE/LiAc重懸酵母細胞，分裝為100uL每管。

二、轉化

（1）在干凈的1.5 mL的離心管中并振蕩混勻。

（2）每個離心管中加入100 µL的酵母感受態細胞，500 µL的PEG/LiAc溶液，加入兩種質粒，并且將管中的混合物進行旋渦振蕩，將其混勻。

（3）在30℃，220 rpm/min的搖床振蕩培養30 min。

（4）往每個離心管中加70 µL的DMSO，并溫和的上下顛倒混勻。將離心管在42℃水浴中熱激40 min（每隔10 min搖勻1次）。

（5）取出離心管，在冰上靜置2 min。

（6）吸取100 µL并涂布在相應的二缺固體培養基上，培養3-4天，待菌長好后，挑單菌落于10ulYPDA液體培養基中，30℃培養過夜。

互作驗證：

取過夜培養的菌液涂布于四缺平板上，將培養皿置于30℃恒溫培養箱中培養，觀察是否生長與顏色變化。

注意事項：

（1）檢測感受態細胞效率，標準操作規范。

（2）注意質粒使用量，檢查儀器狀態。

（3）配制新鮮培養基，并做對照轉化，添加抑制劑，同時增設嚴格的對照組防止自激活。

（4）應挑選大的、新鮮的菌株克隆進行培養。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業資訊和完備的產品和物流服務。 專業的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業性的產品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優秀的銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供服務。